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共同利用研究

Joint Researches

計画共同研究

2017年度計画共同研究実施内容

 計画共同研究は,研究者の要請に基づいて生理学研究所が自らテーマを設定します。2007年度までは,「遺伝子操作モデル動物の生理学的,神経科学的研究」と「バイオ分子センサーと生理機能」の二つが行われました。2008年度からは,「多光子励起法を用いた細胞機能・形態の可視化解析」と「位相差低温電子顕微鏡の医学・生物学応用(2011年度から「先端電子顕微鏡の医学・生物応用」に改題)」が,2009年度からは「マウス・ラットの行動様式解析」が開始されました。また,2011年度から「マウス・ラットの行動代謝解析」が,2012年度から「霊長類への遺伝子導入実験」,「機能生命科学における揺らぎの研究」及び「脳情報の階層的研究」が,開始されました。さらに,2013年度から「ウイルスベクターを用いた神経系への遺伝子導入」が、2016年度から「生体超分子複合体の精製と質量分析法による同定」が、2017年度から「膜機能タンパク質ダイナミクスの解析」が、新設されました。いずれも現在最も高い関心が寄せられている領域であると同時に,生理学研究所が日本における研究の最先端を走っている分野でもあり,多くの共同研究の申請を期待しています。一方、自然科学研究機構のプロジェクトの終了に伴い「機能生命科学における揺らぎの研究」及び「脳情報の階層的研究」は、2015年度にて終了いたしました。「マウス・ラットの行動様式解析」については行動様式解析室の閉鎖予定に伴い、2016年度は、新規申請の採択は行わず既採択分の継続のみ実施して終了いたしました。

2012年度に、長期に渡り継続される申請課題に関して教授会および運営会議で話し合われた結果,以下のことが決定されました。

  1. 申請計画は5年以内に終結する計画とし,明確な目的と実験計画を求める。ただし,5年間の進捗状況によりさらなる延長は可能である。
  2. 申請課題名は具体的なものとし,包括的なテーマでは採択しない。
  3. また,部門ごとに受け入れ件数を限る。一般共同研究:各研究部門・研究施設ごとに原則5件以内とすることが望ましい。計画共同研究:担当課題ごとに原則5件以内とすることが望ましい。

◇ 計画共同研究の詳細は,次の通りです。

「遺伝子操作モデル動物の生理学的,神経科学的研究」

 生理学及び脳科学の研究を推進する上で個体レベルでの解析は重要であり,遺伝子操作モデル動物は非常に有効な実験材料となります。モデル動物開発のための発生工学的技術の革新は近年とくに目覚ましく,日々,発展・進歩を遂げています。生理学・脳科学と発生工学の両方に精通した行動・代謝分子解析センターの遺伝子改変動物作製室が遺伝子操作モデル動物の作製技術を全国の研究者に提供することは,他機関の同種事業に比べても当該研究分野の発展に大きく貢献しています。共同利用研究に供するため,ラットとマウスにおいて,トランスジェニック(Tg)動物やノックアウト(KO)動物のような有用モデルの開発を支援しています。特にラットの遺伝子改変技術は,これまで困難を極めていましたが,最近,ES細胞やiPS細胞の樹立が確立され,ノックアウトラットの作製も可能となりました。同作製室においても,生殖系列寄与能を持つラットES細胞株ならびにiPS細胞株の樹立に成功し,これら幹細胞を使ってKOラット個体やノックイン(KI)ラット個体も獲得しました。2016年度は,研究所外5件の要請があり,合計で21系統の遺伝子改変マウス・ラットの作製を行ない,共同研究先へ提供しました。今後は,人工ヌクレアーゼを利用した新しいゲノム編集技術によるKO/KI動物の作製にも取り組み,その技術を広く提供できるよう努めていきます。

「マウス・ラットの代謝生理機能解析」

 代謝生理解析室は,2010年に発足,2011年より計画共同研究「マウス・ラットの代謝生理機能解析」を開始しました。同室では,生理研内外の研究者が作成,保有する遺伝子改変動物を用いて以下の項目を測定しています。
1)運動系を中心とした覚醒下での単一ニューロン活動などの神経活動の計測。
2)自由行動下における脳内特定部位での神経伝達物質の分泌計測。
3)フラビン及びヘモグロビン由来の内因性シグナルを利用した脳領域活動と膜電位感受性色素を用いた回路活動のイメージング。
4)自由行動下における摂食,エネルギー消費の計測。
5)自由行動下における体温,脈拍数,血圧の計測。6)摘出灌流心臓または麻酔マウスを用いた心機能,循環血流量の測定
 2016年度は,外部機関と10件の共同研究を実施しました。2017年度は,7件実施予定です。

「先端電子顕微鏡の医学・生物学応用」

本計画共同研究では,低温位相差電子顕微鏡(位相差電顕)と連続ブロック表面走査型電子顕微鏡(SBF-SEM)を初めとする当研究所が誇る最先端の電子顕微鏡技術を,医学,生物学のフィールドで有効に活用してもらうために実施します。位相差電顕は,生理学研究所で独自に開発されたもので,無染色の生物試料について,生(なま)に近い状態の構造を高コントラストで1 nm以下の分解能で観察できる性能を持ちます。主な観察対象は,急速凍結された無染色の蛋白質粒子,ウィルス,バクテリア,培養細胞,凍結組織切片などです。また,SBF-SEMは,樹脂に包埋された組織をダイヤモンドナイフで薄く削り,その表面に現れる構造を走査型電子顕微鏡(SEM)により連続的に記録して,試料の三次元構造を再構築する装置です。この方法は脳のように細胞が複雑に入り組んだ組織の三次元形態解析に有効です。数十nmの厚みで数千枚以上の画像を自動で取得することで,一辺が数百μmを越える三次元領域の構造を一度に可視化することができます。
2016年度は22件の計画共同研究が行なわれ、2017年度は17件が予定されています。

「多光子励起法を用いた細胞機能・形態の可視化解析」

  2光子励起蛍光顕微鏡システムは,非侵襲性で組織深部の微細構造を組織や細胞が生きた状態で観察することができる光学顕微鏡です。近年,光学メーカー各社が2光子システムを販売したことにより,国内外で急速に導入が進んでいます。しかしながら,2光子顕微鏡システムを使いこなすためには,顕微システムだけでなく特殊な試料措置や経験が必要なケースがほとんどです。このような事情から,顕微鏡システムだけでなく,試料準備やプローブ選択を含めた高度な技術提供ができる生理研が,共同利用可能な機関としては国内随一となっています。現在,3台の2光子励起顕微鏡(in vivoおよび組織切片実験用)と2台の2光子蛍光寿命イメージング顕微鏡(FRETイメージングによりタンパク質間結合や分子活性化イメージングが可能)が安定的に稼動しています。その性能は世界でトップクラスであり,レーザー光学系の独自の改良により,生体脳において約1ミリメートルの深部構造を1マイクロメートル以下の高解像度で観察できることのみならず,分子間の相互作用や活性化をイメージングすることも可能となっており、多彩な光学顕微鏡イメージングの共同研究への供与に取り組んでいます。
また,これまでに,生体内Ca2+イメージング技術の確立および同一個体・同一微細構造の長期間繰り返し観察の技術の確立に成功しており,これらを利用し,脳,血管,骨組織における生体分子や細胞の可視化について共同研究を実施しています。その他,生体恒常性発達研究部門及び多光子顕微鏡室が研究室単位での共同研究を受け入れています。2016年度は7件の計画共同研究を行ないました。2017年度は4件を予定しています。また,多光子励起顕微鏡システムの購入・自作の相談,および共同研究の可能性についての詳細な相談を多数行ないました。また,多光子励起顕微鏡システムの見学には10件を超える来所者がありました。
 

「ウイルスベクターの作製・供与、および霊長類への遺伝子導入
実験」

 ウイルスベクターを用いて霊長類の脳に遺伝子を導入し,機能分子の発現を制御したり神経活動を変化させたりする技術はこれまで困難とされてきましたが,今や有望な技術として注目されるようになってきました。しかしこのような研究を遂行するには,ベクターの開発,ベクター注入のための実験室など,多くの技術,設備を要します。これらの技術,設備を共同利用に供することにより,高次脳機能やその病態の解明を目指せるよう,2012年度から計画共同研究「霊長類への遺伝子導入実験」を開始しました。2013年度には5件,2014年度には5件の計画共同研究を行ないました。
この実験の中心的な鍵を握るのは、ウイルスベクターの作成と使用です。また、げっ歯類等、霊長類以外への適用も求められます。そのため、2013年度から、計画共同研究「ウイルスベクターを用いた神経系への遺伝子導入」を開始しました。生理研ウイルスベクター開発室では,各種血清型のアデノ随伴ウイルスベクター,従来型のレンチウイルスベクター,神経路特異的な機能操作を可能にする高頻度逆行性レンチウイルスベクターなどを提供するとともに、より有用な新規ウイルスベクターの開発にも取り組んでいます。2014年度までに,生理学研究所内外の研究室に延べ数で 100 件を超えるウイルスベクターの提供を行いました。2013年度は2件,2014年度は4件の計画共同研究を行ないました。
  2015年度からは、ふたつの計画共同研究を統合して「ウイルスベクターの作製・供与、および霊長類への遺伝子導入実験」として募集を行い、総計14件を実施しました。
これまでの成果としては、以下が挙げられます。マカクサル運動皮質損傷後の機能回復にともなう代償的運動出力経路の解明では,このような代償的経路の解析にウイルスベクターを用いる方法の検討を行い、中脳における神経回路操作を行うための対照実験の結果、霊長類の脳の深部への注入方法を確立できました。遺伝子改変サルモデルを用いた大脳基底核の機能と病態の解明においては,ウイルスベクターとイムノトキシン法を用いて,大脳基底核の神経経路のうちハイパー直接路(大脳皮質-視床下核路)の選択的除去に成功しました。霊長類脳遺伝子発現抑制実験へのPET分子イメージング法の応用では,ウイルスベクターを用いたRNA干渉による遺伝子発現抑制をPETで観察することに成功しました。
2016年度には13件の計画共同研究を実施しました。2017年度には9件を予定しています。

 

「生体超分子複合体の精製と質量分析法による同定」

  生体内でのタンパク質の機能を理解するためには、生体内での超分子複合体の構成タンパク質を正確に同定することが必要不可欠です。そのために、組織や細胞からタンパク質複合体を、特異性を重視して精製し、質量分析装置により構成タンパク質の同定や、自己免疫性疾患の自己抗体の標的抗原の同定を行う研究手法に対するニーズが高まっています。そのニーズに応えるために、新たに本計画研究を立ち上げ公募を開始し、2016年は2件実施しました。2017年度も、2件を予定しています。

 

「膜機能タンパク質ダイナミクスの解析」

 イオンチャネル・受容体等の膜機能タンパク質は、精緻にデザインされた分子であるとともに、状況に依存した構造と機能の動的変化をきたします。この動的側面を対象として、in vitro発現系を用いた電気生理学及び光生理学の手法による実験および解析を行うために本計画共同研究を立ち上げ公募を開始し、2017年度は6件を実施予定としています。

2017年度採択課題一覧

(1)遺伝子操作モデル動物の作製と生理学的・神経科学的解析
(2)マウス・ラットの代謝生理機能解析
(3)先端電子顕微鏡の医学・生物学応用
(4)多光子励起法を用いた細胞機能・形態の可視化解析
(5) ウィルスベクターの作製・供与、および霊長類への遺伝子導入実験
(6)生体超分子複合体の精製と質量分析法による同定
 

No. 研究課題名 氏 名 計画区分
1 哺乳類カリウムチャネルのイオン選択性を制御する構造ダイナミクスの解析 古谷 祐詞
(自然科学研究機構・分子科学研究所)
(7)
2 多様な生物種に基づいたイオンチャネルと受容体機能の解析 岡村 康司
(大阪大学・大学院医学系研究科)
(7)
3 アクティブゾーンタンパク質CASTの標的蛋白質の同定 大塚 稔久
(山梨大学・大学院総合研究部医学域)
(6)
4 自己免疫性脳炎における自己抗体の標的蛋白質の同定 木村 暁夫
(岐阜大学・大学院医学系研究科)
(6)
5 細胞分化・老化過程を3次元構造解析するための技術開発 岩根 敦子
(理化学研究所・生命システム研究センター)
(3)
6 SBF-SEMを用いた髄鞘の軸索機能調節機序の解析 馬場 広子
(東京薬科大学・薬学部)
(3)
7 甲状腺乳頭癌細胞の核形態-SBF-SEMによる3次元解析- 加藤 良平
(山梨大学・大学院総合研究部医学域)
(3)
8 高脂肪食摂取下における腸管粘膜防御機能と吸収機構に関するメカニズムの解明 志茂 聡
(健康科学大学・健康科学部)
(3)
9 昆虫視覚系におけるヒスタミン駆動性CI-チャネルの機構解析 蟻川 謙太郎
(総合研究大学院大学・先導科学研究科)
(7)
10 脂肪細胞におけるUCP1発現制御におけるTRPチャネルの機能解析 河田 照雄
(京都大学・大学院農学研究科)
(2)
11 温度感受性TRPチャネルの細胞応答と調節メカニズムの解明 太田 利男
(鳥取大学・農学部)
(7)
12 TRPチャネルの温度依存的活性化における細胞膜皮質の関与 山﨑 純
(福岡歯科大学・口腔歯学部)
(7)
13 温度感受性TRPチャネルを介した細胞間接着機構の解明 城戸 瑞穂
(佐賀大学・医学部)
(7)
14 メカノ作動性分子を標的としたドラッグリポジショニング研究 津田 誠
(九州大学・大学院薬学研究院)
(2)
15 摂食調節ペプチドによるエネルギー代謝調節機構の解明 塩田 清二
(星薬科大学・先端生命科学研究所)
(2)
16 多光子顕微鏡を用いた嗅球ニューロンのターンオーバーを制御する微小環境の可視化解析 澤本 和延
(名古屋市立大学・大学院医学研究科)
(4)
17 神経回路形成におけるクラスター型プロトカドヘリンの解析 八木 健
(大阪大学・大学院生命機能研究科)
(4)
18 高時空間分解能を持つ光刺激による神経細胞活動操作法の開発 和氣 弘明
(神戸大学・大学院医学研究科)
(4)
19 動物モデルへの双方向性計測操作による発振現象の理解 虫明 元
(東北大学・大学院医学系研究科)
(5)
20 光刺激法を用いた大脳基底核神経回路機能の解析 籾山 俊彦
(東京慈恵会医科大学・医学部)
(2)
21 ビオプテリン部分欠乏マウスにおける運動障害発症機構の解析 一瀬 宏
(東京工業大学・生命理工学院)
(2)
22 ドーパミン受容体遺伝子操作マウスを用いた運動制御機構の解析 笹岡 俊邦
(新潟大学・脳研究所)
(2)
23 大脳基底核アストロサイトによる運動制御機構の電気生理学的解析 和中 明生
(奈良県立医科大学・医学部)
(2)
24 ミクロトーム組込み型走査電子顕微鏡(SBF-SEM)を用いた脳動脈瘤形成における超微細形態変化の解明 小関 宏和
(東京女子医科大学・東医療センター)
(3)
25 SBF-SEMを利用した骨格筋の酸化ストレスによるミトコンドリアの構造変化の解析 渡邉 敬文
(信州大学・学術研究院農学系)
(3)
26 連続ブロック表面SEMによるカエル舌の茸状乳頭上皮に分布する神経、および上皮の三次元構造解析 田所 治
(松本歯科大学・歯学部)
(3)
27 成体脳内における新生ニューロンの高速移動を制御する超微細構造の解析 澤本 和延
(名古屋市立大学・大学院医学研究科)
(3)
28 細胞接着分子の遺伝子欠損による異常な精子完成における精子細胞とセルトリ細胞の相互作用に関連する膜性構造物の三次元的構造解析 若山 友彦
(熊本大学・大学院生命科学研究部)
(3)
29 バクテリアDNA凝集構造の位相差電子顕微鏡による観察 金子 康子
(埼玉大学・教育学部)
(3)
30 小胞体フォールディングセンサー酵素UGGTの電子顕微鏡解析 佐藤 匡史
(名古屋市立大学・大学院薬学研究科)
(3)
31 SBF-SEM3次元立体再構築法を用いた細胞接着関連分子による神経シナプス形成機構の形態構造レベルでの解析 溝口 明
(三重大学・大学院医学系研究科)
(3)
32 イネ萎縮ウイルスの構造構築機構の解明 中川 敦史
(大阪大学・蛋白質研究所)
(3)
33 連続ブロック表面SEMによる感覚ニューロン系の3次元超微形態解析 高浪 景子
(岡山大学・大学院自然科学研究科)
(3)
34 Xanthomonas citriに感染する巨大バクテリオファージXacN1のクライオ電子顕微鏡単粒子構造解析 山田 隆
(広島大学・大学院先端物質科学研究科)
(3)
35 SBF-SEMを用いた小型甲殻類の比較形態学 PALMER, Richard
(アルバータ大学・生物学科)
(3)
36 従来型解析にバイオインフォマティクスを取り入れた新規長鎖遺伝子の機能解明 増田 知之
(筑波大学・医学医療系)
(5)
37 ウイルス遺伝子工学による腹側海馬ー腹側線条体回路の生理的役割の解明 田中 謙二
(慶應義塾大学・医学部)
(5)
38 アデノ随伴ウイルス遺伝子導入を用いた神経発生および恒常性維持の分子メカニズム解析 備前 典久
(新潟大学・大学院医歯学総合研究科)
(5)
39 ウィルスベクターを用いた集中的リハビリテーションの作用機序の検討 飛田 秀樹
(名古屋市立大学・大学院医学研究科)
(5)
40 逆行性ウィルスベクターを用いた体液恒常性維持神経回路の解析 野田 昌晴
(自然科学研究機構・基礎生物学研究所)
(5)
41 ウイルスベクターを用いた経路選択的遺伝子操作による霊長類神経回路の機能解析 伊佐 正
(京都大学・大学院医学研究科)
(5)
42 皮質・基底核・視床回路を解析する研究 藤山 文乃
(同志社大学・大学院脳科学研究科)
(5)
43 外側傍小脳脚核ー扁桃体中心核外側部投射路の情動における役割 重本 隆一
(IST Austria・)
(5)
44 小脳をモデルとした抑制性ニューロンの「数」制御メカニズム 金子 涼輔
(群馬大学・大学院医学系研究科)
(1)
45 生理学的アプローチによるクラスター型プロトカドヘリン(Pcdh)の視覚神経回路形成の機能解明 大木 研一
(東京大学・大学院医学系研究科)
(1)
46 ヒト型SIRPaを発現するヒト化モデルラットの作製

濱仲 早苗
(東京大学・医科学研究所)

(1)
47 摂食と生殖を制御するエネルギーセンサー細胞とその神経経路の同定 前多 敬一郎
(東京大学・大学院農学生命科学研究科)
(1)
48 ラット遺伝子のBACクローンへのレコンビナーゼCre-ERの組込みと作製したトランスジェニックラットの組織化学・細胞生物学的研究 加藤 幸雄
(明治大学・農学部)
(1)
49 生殖を制御する脳内メカニズム解明のための遺伝子改変モデルの作製とその解析 束村 博子
(名古屋大学・大学院生命農学研究科)
(1)
50 ヒストンH2BユビキチンリガーゼBrelaの神経幹細胞における機能の解析 等 誠司
(滋賀医科大学・医学部)
(1)
51 機能的な神経回路形成における神経細胞の個性化の役割 八木 健
(大阪大学・大学院生命機能研究科)
(1)
52 染色体工学技術による疾患モデルラットの作製 香月 康宏
(鳥取大学・染色体工学研究センター)
(1)
53 3次元走査型電子顕微鏡(SEM)を用いた進行性糸球体疾患の荒廃に至る動態の解析 城 謙輔
(東北大学・大学院医学系研究科)
(3)
54 シナプスパターン形成時におけるRap GTPaseの活性制御機構の解明 水本 公大
(The University of British Columbia・)
(4)
 

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