生理学実験技術データベース
Experimental Techniques for Physiological Sciences
D-2
Last update: 2010-04-15
mutagenesis
| Summary | This is a simple and rapid mutational method by using polymerase chain reaction(PCR). |
|---|---|
| 用途 |
既存の遺伝子にＰＣＲを利用して変異を導入する。 ①ワンポイントミューテーションの導入。 ②近傍２箇所に同時にミューテーションを導入，欠損ミュータントの作製 |
| 特徴 |
プロトコールは市販Kit（Quik Change; Stratagene)や報告済みの方法をほぼ踏襲していますが，使用する酵素を正確性のより高いものに変更しました。 条件設定も酵素にあわせて変更しています。 |
| 主な試薬・機器 |
PCR PrimeSTAR<TM> HS DNA Polymerase (TaKaRa), DpnI（NEB） Primer ②は上記に加え，T4 Polynucleotide Kinase (TaKaRa) T4DNA ligase& 2x buffer (Promega） |
| 方法 | Quik Change modify.pdf |